Preview

Нефрология

Расширенный поиск

РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭЛЕКТРОЛИТОВ В АМНИОТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ КРОЛЬЧИХ НА СРОКЕ 27–28 СУТ БЕРЕМЕННОСТИ

https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-1-68-72

Полный текст:

Аннотация

ЦЕЛЬ: определить референтные пределы объема, осмоляльности и концентрации ионов Na+, K+, Cl , неорганического фосфата (Pi ) и Ca2+ в амниотической жидкости (АЖ) крольчих на сроке беременности 27–28 сут. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. В исследовании на первобеременных крольчихах (n = 6) получены 37 образцов АЖ, в которых определены масса плода, масса плодной части плаценты, объем, осмоляльность и концентрации ионов Na+, K+, Cl , Pi и Ca2+. РЕЗУЛЬТАТЫ. Установлены референтные пределы объема (0,09–1,63 мл), осмоляльности (210,0–267,0, мОсмоль/кг) и концентрации ионов Na+ (110,0–146,0 ммоль/л), K+ (6,0–12,4 ммоль/л), Cl (87,0–117,0 ммоль/л), Ca2+ (1,88—2,89 ммоль/л) и Pi (0,56—1,57 ммоль/л) в АЖ. Обнаружена обратная корреляция объема АЖ с массой плода (r = –0,525, p < 0,001), а также положительная корреляция между массой плода и осмоляльностью АЖ (r = 0,375, p = 0,022). Концентрации ионов Na+, K+, Clкоррелировали с массой плаценты (r = 0,368, p = 0,025; r = 0,353, p = 0,032; r = 0,381, p = 0,020 соответственно). Осмоляльность АЖ коррелировала с концентрациями ионов Na+ (r = 0,514, p < 0,001) и Cl (r = 0,510, p < 0,001). ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Полученные результаты могут быть использованы для разработки животных моделей влияния лекарственных препаратов на объем, осмоляльность и ионный состав АЖ на поздних сроках беременности

Для цитирования:


Сузопов Е.В., Лытарь И.А., Поповцева А.В., Кореновский Ю.В. РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭЛЕКТРОЛИТОВ В АМНИОТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ КРОЛЬЧИХ НА СРОКЕ 27–28 СУТ БЕРЕМЕННОСТИ. Нефрология. 2017;21(1):68-72. https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-1-68-72

For citation:


Suzopov E.V., Lytar I.A., Popovtceva A.V., Korenovskii Y.V. ELECTROLYTES CONCENTRATION REFERENCE LIMITS IN AMNIOTIC FLUID OF RABBITS ON 27-28 DAY OF GESTATION. Nephrology (Saint-Petersburg). 2017;21(1):68-72. (In Russ.) https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-1-68-72

ВВЕДЕНИЕ

В физиологической регуляции объема амнио­тической жидкости (АЖ) и ее состава многое остается неясным, что связано с двумя фактора­ми: 1) существует восемь потенциальных путей формирования и оттока АЖ (моча плода, интрамембранный путь, заглатывание, секрет легких, секрет носоглотки, трансмембранный и чрескож­ный пути, а также перенос через поверхность пуповины); 2) скорость перехода воды и раство­ренных веществ через большинство из этих путей редко измеряется одновременно [1]. Без знания нормальных значений концентрации ионов в АЖ, ее объема и осмоляльности у животных невоз­можно создание модели для изучения патологии регуляции объема АЖ и фармакокинетики лекар­ственных препаратов на поздних сроках беремен­ности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование проведено на первобеременных крольчихах (n = 6) массой 4-5 кг на сроке беремен­ности 27-28 сут (при нормальной длительности беременности у кроликов 31 сут). Оплодотворение проводили разными случайно выбранными самца­ми, после чего крольчихи находились в одиночных клетках на свободном питании. На 27-28-е сутки беременности животных умерщвляли методом цервикальной дислокации и через 15 мин прово­дили срединную лапаротомию и удаляли матку. Из полости матки высекали и извлекали амниотиче­ские мешки с плодами (n = 75) и разделяли мате­ринскую и плодную части плаценты, не нарушая целостности амниотического мешка. Одноразо­вым шприцем из амниотического мешка извлекал­ся весь доступный объем амниотической жидко­сти. Измерялись масса плода, плодной части пла­центы и общий объем амниотической жидкости.

Критериями включения крольчих в исследова­ние были: 1) срок беременности 27-28 сут; 2) мас­са беременных крольчих 4-5 кг. Критериями ис­ключения плодов из исследования были: 1) масса плода менее 20 г; 2) объем амниотической жидко­сти в амниотическом мешке менее 50 мкл; 3) на­личие в амниотической жидкости визуально вы­являемой крови (табл. 1). Общая характеристика плодов представлена в табл. 2. Как видно из пред­ставленных данных, только в двух третях наблю­дений удалось получить достаточный для иссле­дования объем амниотической жидкости пригод­ного для исследования качества.

 

Таблица 1

Критерии исключения плодов кроликов из исследования

Критерий исключения

n (%)

Масса плода менее 20 г

7 (12,5)

Объем амниотической жидкости менее 50 мкл

8 (14,3)

Наличие в АЖ крови

4(7,1)

Всего

19 (33,9)

 

Таблица 2

Масса плода и плаценты крольчат на 27-28-е сутки жизни (n = 37)

Масса, г

Среднее ± стандартное ква­дратическое отклонение

Медиана (25-75%)

2,5-97,5%

Нормальность распределения по критерию Шапиро-Уилка

Плода

36,7 ± 6,56

39,0 (31,0-41,9)

24,3-45,5

W = 0,906

p = 0,004

Плаценты

3,99 ± 2,014

3,47 (3,07-4,07)

2,48-10,79

W = 0,580

p < 0,001

Образцы амниотической жидкости центрифу­гировали в течение 15 мин при 1200 g, заморажи­вали и хранили при температуре -20 °С не более одного месяца до проведения биохимического ис­следования. В образцах амниотической жидкости определяли концентрации ионов Na+, K+, Cl-, не­органического фосфата (P.) и Ca2+, а также осмо- ляльность амниотической жидкости.

Концентрации ионов Na+, K+ и Cl- определяли потенциометрическим методом на автоматическом биохимическом анализаторе «Dimension Xpand» («Siemens», Германия) с использованием моду­ля «QuikLyte Integrate Multisensor» («Siemens», США). Общую концентрацию ионов Ca2+ опреде­ляли колориметрическим методом набором реа­гентов «CA Calcium Flex reagent cartridge» (кат. № EA4164) («Siemens», США) на автоматическом биохимическом анализаторе «Dimension Xpand» («Siemens», Германия). Концентрацию Pi, который при физиологических значениях pH представляет собой смесь ионов HPO42- и H2PO4-, определяли колориметрическим методом набором реагентов «PHOS Phosphorus Flex reagent cartridge» (кат. № EA 4172) («Siemens», США) на автоматическом биохимическом анализаторе «Dimension Xpand» («Siemens», Германия). Осмоляльность амнио­тической жидкости определяли по принципу из­мерения давления паров при помощи осмометра «Vapro» («Wescor», США).

Статистический анализ данных проводили с использованием пакета прикладлынх статистиче­ских программ JMP 7.0 (SAS Institute, США). Рас­считывали среднее, стандартное квадратическое отклонение, ошибку среднего, нормальность рас­пределения по критерию Шапиро - Уилка). Вы­полняли множественный корреляционный анализ с использованием коэффициента Пирсона при нормальном распределении или по коэффициен­та Спирмена - при ненормальном распределении. Для определения референтных величин концен­траций компонентов амниотической жидкости рассчитывали 2,5-й и 97,5-й процентили [2]. Ну­левую статистическую гипотезу об отсутствии различий и связей отвергали при p<0,05.

Настоящая работа одобрена локальным эти­ческим комитетом ГБОУ ВПО АГМУ Минздрава России.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты исследования объема АЖ, а также концентрации ионов в АЖ и ее осмоляльности представлены в табл. 3. Из исследованных неор­ганических ионов в АЖ максимальная концентра­ция регистрировалась у ионов Na+ и Cl-, а мини­мальная - у ионов Pi и Ca2+.

Объем амниотической жидкости обратно кор­релировал с массой плода (г = -0,525, p < 0,001), что подтверждает многочисленные свидетельства уменьшения объема АЖ перед родами [3]. На ак­тивацию процессов сохранения воды перед рода­ми также указывает корреляция осмоляльности АЖ с массой плода (г = 0,375, p = 0,022).

Концентрация ионов Na+, K+, Cl-, но не ионов Ca2+ или Pi. коррелировала с массой плаценты (г = 0,368, p = 0,025; г = 0,353, p = 0,032; г = 0,381, p = 0,020; г = -0,003, p = 0,987 и г = 0,079, p = 0,642 соответственно), что свидетельствует о важ­ности ее нормальной функции в переносе ионов Na+, K+, Cl- для водно-солевого баланса плода, а отсутствие корреляционной связи между массой плаценты и концентрациями ионов Ca2+ или Pi в АЖ указывает на большее значение плода в регу­ляции экскреции этих ионов.

 

Таблица 3

Ионный состав и осмоляльность амниотической жидкости (n = 37)

Параметр

Среднее ± стандартное ква­дратическое отклонение

Медиана (25-75%)

2,5-97,5%

Нормальность распределения по W-критерию Шапиро-Уилка

Объем амниотической жидкости, мл

0,57 ± 0,400

0,46 (0,25-0,77)

0,09-1,63

W = 0,859

p < 0,001

Na+, ммоль/л

132,1 ± 6,39

132,0 (129,0-135,3)

110,0-146,0

W = 0,927

p = 0,018

K+, ммоль/л

7,9 ± 1,54

7,4 (6,7 - 8,9)

6,0-12,4

W = 0,910

p = 0,006

Cl-, ммоль/л

103,4 ± 5,62

102,0 (100,6-106,0)

87,0-117,0

W = 0,914 p = 0,007

Ca2+, ммоль/л

2,19 ± 0,209

2,13 (2,05-2,30)

1,88-2,89

W = 0,879

p < 0,001

Pi, ммоль/л

0,97 ± 0,231

1,00 (0,79-1,10)

0,56-1,57

W = 0,945 p = 0,069

Осмоляльность,

мОсмоль/кг

236,3 ± 15,52

237,0 (223,0-245,3)

210,0-267,0

W = 0,971 p = 0,447

Осмоляльность АЖ в значительной степени определялась концентрациями ионов Na+ и Cl- и в меньшей степени концентрацией ионов K+. На это указывает мощная корреляционная связь между осмоляльностью АЖ и концентрациями ионов Na+ и Cl- и менее значимая связь осмоляльности с концентрацией ионов K+: г = 0,514, p < 0,001, г = 0,510, p < 0,001 и г = 0,316, p = 0,057 соответ­ственно.

ОБСУЖДЕНИЕ

АЖ отражает гомеостаз как плодов, так и мате­ринского организма [4-6]. Определение нормаль­ных биохимических параметров АЖ необходимо для изучения регуляции ее ионного состава, объ­ема и механизма образования, что позволит раз­работать действующую модель для исследования фармакокинетики лекарственных препаратов в беременных организмах.

В регуляции объема и состава АЖ участвуют несколько механизмов: диурез плода, интрамем- бранный путь, заглатывание, секреция легкими и носоглоткой, трансмембранный путь, чрескож­ный путь и всасывание через эпителий пуповины [1]. Следует учитывать, что в конце беременно­сти, когда проводилось исследование, кожа плода кератинизирована [1], вследствие чего чрескож­ный и пуповинный путь возможно не учитывать. Оставшиеся шесть путей можно разделить на пути формирования (моча плода, секрет легких и секрет носоглотки), ведущие к увеличению объ­ема АЖ, и пути оттока (интрамембранный путь, заглатывание и трансмембранный путь), ведущие к его уменьшению.

Моча плода - основной путь формирования АЖ. Доказано, что объем АЖ и скорость тока мочи пло­да коррелируют друг с другом [7]. По-видимому, моча является источником для большинства ионов (Na+, K+, Cl-, Ca2+ и Pi) АЖ, поскольку образует приблизительно три четверти ее объема [1].

Секрет легких - другой важный путь форми­рования АЖ. Его наличие доказывается наличием сурфактанта в АЖ в конце беременности [8]. Од­нако установить истинный вклад секрета легких затруднительно, так как его большая часть еще до выхода в АЖ заглатывается [9]. Объем секрета легких составляет около четверти всей произво­димой АЖ [1].

Секрет носоглотки также является путем фор­мирования АЖ, однако на практике отследить его динамику еще более затруднительно, так как вы­деления носоглотки проглатываются полностью, и отличить их от секрета легких можно только большим содержанием K+ и слизи [10].

Интрамембранное всасывание - переход воды и растворенных веществ через амнион в сосуды плода. Интрамембранный путь имеет два компо­нента: пассивный и активный [11]. Пассивный компонент - двунаправленный, постоянный и соответствует простой диффузии по градиенту концентрации. В обычных условиях пассивный компонент характеризуется притоком жидкости в плод и секрецией ионов Na+ и Cl- из плода в АЖ [12]. Активный компонент является однонаправ­ленным и является основным путем оттока АЖ [13, 14]. Интрамембранное всасывание обеспечи­вает около двух третей оттока АЖ [1].

Заглатывание АЖ плодом также является зна­чимым путем удаления АЖ из амниотического мешка. Заглатывание обычно вызвано ответом плода на изменение объема АЖ, т.е. ответной ре­акцией ЦНС [15]. При увеличении объема АЖ объем заглатываемой АЖ также возрастает, а при маловодии - уменьшается [16]. Заглатывание обе­спечивает около трети оттока АЖ [1].

Трансмембранный путь в конце беременности представлен в небольшом объеме, однако важен в начале гестации, так как проницаемый хорион позволяет жидкости, вырабатываемой стенкой матки, проникнуть в плодное яйцо [1]. Увеличе­ние осмоляльности АЖ ведет к ее всасыванию в организм матери, но в небольших объемах, на­столько низких по сравнению с другими потока­ми, что этот путь в конце беременности возможно не учитывать.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди описанных путей образования и удале­ния АЖ перед родами наибольшее значение име­ет образование АЖ из компонентов мочи и секре­та легких плода, а удаление - с использованием интрамембранного пути оттока и заглатывания АЖ. Полученные результаты нормальных кон­центраций исследованных ионов в АЖ, а также ее объема и осмоляльности являются следствием функционирования представленных путей фор­мирования и оттока АЖ. Эти данные могут быть использованы для разработки животных моделей влияния лекарственных препаратов (в частности, диуретиков) на объем, осмоляльность и ионный состав АЖ на поздних сроках беременности.

Об авторах

Е. В. Сузопов
Алтайский государственный медицинский университет
Россия

Сузопов Егор Валерьевич  - студент лечебного факультета, кафедра биохимии и лабораторной диагностики. 



И. А. Лытарь
Алтайский государственный медицинский университет
Россия

Лытарь Ирина Александровна - ассистент

Кафедра патофизиологии, клинической патофизиологии с курсом ФПК и ППС. 

656038, Алтайский край, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40. 



А. В. Поповцева
Алтайский государственный медицинский университет
Россия

Поповцева Анна Валентиновна, кандидат медицинских наук, доцент.

Кафедра биохимии и клинической лабораторной диагностики. 

656038, Алтайский край, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40. 



Ю. В. Кореновский
Алтайский государственный медицинский университет
Россия

Кореновский Юрий Владимирович, , кандидат медицинских наук, доцент

Кафедра биохимии и клинической лабораторной диагностики.  

656038, Алтайский край, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40



Список литературы

1. Brace RA, Cheung CY. Regulation of amniotic fluid volume: evolving concepts Adv Exp Med Biol 2014;814:49-68. DOI: 10.1007/978-1-4939-1031-1_5

2. Khan MI. Weinstock RS. (2011) in: Henry’s clinical diagnosis and management by laboratory methods. – 22nd ed. (McPherson R.A., Pincus M.R.) Elsevier Saunders, Philadelfia, p. 224. DOI: 10.1016/b978-1-4377-0974-2.00016-6

3. Brace RA. Physiology of amniotic fluid volume regulation. Clin Obstet Gynecol 1997; 40(2):280–289. DOI: 10.1097/00003081-199706000-00005

4. Кореновский ЮВ, Калитникова ИА, Бурякова СИ и др. Регуляция объема амниотической жидкости. Акуш и гин 2016;(2):44–48. [Korenovsky YV, Kalitnikova IA, Buryakova SI et al. Amniotic fluid volume regulation. Akush Ginekol (Mosk). 2016;(2):44-48] DOI: 10.18565/aig.2016.2.44-48

5. Ross MG, Nijland MJM. Development of ingestive behavior. Am J Physiol 1998;274:879-893

6. Tong X. Amniotic fluid may act as a transporting pathway for signaling molecules and stem cells during the embryonic development of amniotes. J Chin Med Assoc 2013;76:606–610. DOI: 10.1016/j.jcma.2013.07.006

7. Mann SE, Nijland MJ, Ross MG. Ovine adaptations to chronically reduced urine flow: preservation of amniotic fluid volume. J Appl Physiol 1996;81:2588-2594. DOI: 10.1016/10715576(95)94484-c

8. Brace RA, Wlodek ME, Cock ML, Harding R. Swallowing of lung liquid and amniotic fluid by the ovine fetus under normoxic and hypoxic conditions. Am J Obstet Gynecol 1994;171:764-770. DOI: 10.1016/0002-9378(94)90094-9

9. Robertson P, Faber JJ, Brace RA et al. Responses of amniotic fluid volume and its four major flows to lung liquid diversion and amniotic infusion in the ovine fetus. Reprod Sci 2009;16:88-93. DOI: 10.1177/1933719108324888

10. Brace RA, Anderson DF, Cheung CY. Ovine fetal swallowing responses to polyhydramnios. Physiol Rep 2014;2(3):e00279. DOI: 10.1002/phy2.279

11. Gesteland KM, Anderson DF, Davis LE et al. Intramembranous solute and water fluxes during high intramembranous absorption rates in fetal sheep with and without lung liquid diversion. Am J Obstet Gynecol 2009;201:85.e1-6. DOI: 10.1016/j.ajog.2009.02.018

12. Faber JJ, Anderson DF. Absorption of amniotic fluid by amniochorion in sheep. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2002;282: 850-854. DOI: 10.1152/ajpheart.00746.2001

13. Daneshmand SS, Cheung CY, Brace RA. Regulation of amniotic fluid volume by intramembranous absorption in sheep: role of passive permeability and vascular endothelial growth factor. Am J Obstet Gynecol 2003;188:786-793. DOI: 10.1016/j.jsgi.2003.09.002

14. Jellyman JK, Anderson DF, Faber JJ et al. Amniotic fluid volume and intramembranous absorption responses to tracheoesophageal shunt or esophageal ligation in fetal sheep. Am J Obstet Gynecol 2009;200:313.e1-6. DOI: 10.1016/j.ajog.2008.10.025

15. Ross MG, Brace RA, National Institute of Child Health and Development Workshop Participants. National Institute of Child Health and Development Conference summary: amniotic fluid biology–basic and clinical aspects. J Matern Fetal Med 2001;10:2-19. DOI: 10.1080/jmf.10.1.2.19

16. Brace RA, Anderson DF, Cheung CY. Fetal swallowing as a protective mechanism against oligohydramnios and polyhydramnios in late gestation sheep. Reprod Sci 2013;20:326-330. DOI: 10.1177/1933719112453510


Для цитирования:


Сузопов Е.В., Лытарь И.А., Поповцева А.В., Кореновский Ю.В. РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭЛЕКТРОЛИТОВ В АМНИОТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ КРОЛЬЧИХ НА СРОКЕ 27–28 СУТ БЕРЕМЕННОСТИ. Нефрология. 2017;21(1):68-72. https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-1-68-72

For citation:


Suzopov E.V., Lytar I.A., Popovtceva A.V., Korenovskii Y.V. ELECTROLYTES CONCENTRATION REFERENCE LIMITS IN AMNIOTIC FLUID OF RABBITS ON 27-28 DAY OF GESTATION. Nephrology (Saint-Petersburg). 2017;21(1):68-72. (In Russ.) https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-1-68-72

Просмотров: 88


ISSN 1561-6274 (Print)
ISSN 2541-9439 (Online)