ЗАВИСИМОСТЬ ПОЧЕЧНЫХ ЭФФЕКТОВ ГИСТОХРОМА У КРЫС ОТ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ДОЗЫ

ВВЕДЕНИЕ

Гистохром - известный отечественный лекар­ственный препарат природного происхождения. Согласно действующей регистрационной номен­клатуре, он относится к группе антиоксидантных средств [1-3]. Вместе с тем, экспериментальные наблюдения последних лет позволяют существен­но расширить понимание особенностей фармако­логической активности данного препарата. Так, в недавних опытах мы установили, что гистохром в дозе 10 мг/кг оказывает выраженный мочегонный эффект, механизм которого не поддается тради­ционному для классических диуретиков объясне­нию [4, 5]. Параллельно нами было обнаружено, что в той же дозе гистохром в опытах на крысах, вопреки имеющимся представлениям, обладает не анти-, а прооксидантной активностью. В то же время, при десятикратном снижении дозировки препарата наблюдался противоположный (и хо­рошо согласующийся с общепринятым мнением) эффект: подавление оксидативного стресса в кро­ви подопытных животных [6, 7]. Таким образом, мы установили зависимость влияния испытуемо­го препарата на процесс свободно-радикального окисления от использованной дозы. В этой связи возник вопрос, не присутствует ли подобная за­висимость при действии гистохрома на функцию почек? Изучение экскреторной способности по­чек крыс в условиях введения 1 и 10 мг/кг гистох­рома стало целью настоящего исследования.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Исследование проводилось в условиях хрони­ческого эксперимента на аутбредных крысах сток Вистар обоего пола в возрасте 2-3 мес и массой 200-300 г, выращенных в питомнике ГУ НИИ ци­тологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск). За четыре недели до начала эксперимента животные помещались в индивидуальные клетки, приспосо­бленные для сбора мочи, где находились в услови­ях стандартной лабораторной диеты, свободного потребления обычной питьевой воды, естествен­ного освещения и температурного режима 18­22 °C. В течение указанного адаптационного пе­риода осуществлялась оценка пригодности крыс для изучения влияния лекарственного средства на экскреторную функцию почек согласно отра­ботанной в нашей лаборатории методике [8]. По итогам такой оценки в подопытную группу для непосредственного изучения влияния гистохрома на функцию почек в дозе 1 мг/кг было отобрано 15 крыс. Введение препарата осуществлялось еже­дневно на протяжении 10 дней путем подкожных инъекций. Раствор для инъекций готовился разве­дением заводской лекарственной формы «Гистох­ром® раствор для внутривенного введения 1%» обычным физиологическим раствором с таким расчетом, чтобы вводимая доза содержалась в 1 мл. В процессе исследования в подопытной груп­пе на 3-, 5-, 7-, 9-е и 11-е сутки периода наблюде­ния измерялись следующие показатели: величина суточного мочеотделения, экскреция с мочой ио­нов Na+ и K+, экскреция креатинина, а также экс­креция самого гистохрома. Экскрецию ионов Na+ и K+ оценивали методом пламенной фотометрии. Определение креатинина проводилось с исполь­зованием реакции образования основания Шиф- фа, количество которого затем детектировалось фотометрическим способом [8]. Определение экскреции гистохрома с мочой проводилось при помощи высокоэффективной жидкостной хрома­тографии на хроматографе «Милихром-А02». Ре­зультаты влияния гистохрома на функцию почек в дозе 10 мг/кг были взяты из нашего предыдуще­го эксперимента [8]. В данном исследовании они служили объектом сравнения.

Эксперименты выполнены с соблюдением принципов и директив Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации и в со­ответствии с «Правилами проведения работ с ис­пользованием экспериментальных животных».

При статистическом анализе данных использо­вали пакет прикладных статистических программ «Statistica 7.0» («StatSoft», США). Результаты представлены в виде среднего арифметического ± ошибка средней. Статистическую значимость различий двух средних определяли с помощью критерия Вилкоксона. Нулевую статистическую гипотезу об отсутствии различий и связей отвер­гали при p<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Проведенные эксперименты показали, что, не­смотря на длительное непрерывное введение ги­стохрома в дозе 1 мг/кг, прирост величины суточ­ного мочеотделения проявлялся лишь в виде тен­денции, превышая исходный уровень на 11-64% в отдельные дни наблюдения (табл. 1).

При этом все отмеченные изменения оказались недостоверными. В то же время, в группе сравне­ния, получавшей препарат в дозе 10 мг/кг, фик­сировалось последовательное усиление диуреза, достигавшее своего максимума к 7-му дню введе­ния, когда он превышал исходные значения почти в 5 раз. Диуретический эффект в этих условиях сохранялся даже через 1 сут после отмены пре­парата, превышая исходные значения более чем в 3,5 раза (табл. 2).

В отношении динамики почечной экскреции креатинина у животных, получавших гистохром в дозе 1 мг/кг, было установлено, что этот пока­затель также имел весьма стабильный характер в течение всего опыта. Как следует из табл. 1, фик­сировались лишь небольшие колебания суточной элиминации креатинина, превышавшие исходные значения на 30%, которые не являлись статисти­чески достоверными и что примерно соответство­вало приросту суточного мочеотделения. У крыс группы сравнения в ходе эксперимента также было зафиксировано увеличение экскреции креа- тинина, параллельное росту диуреза, однако это увеличение было намного более выраженным с пиком на седьмой день введения препарата, когда описываемый показатель превосходил исходный уровень в 5,6 раза (см. табл. 2).

Иная динамика была зафиксирована в отноше­нии почечной экскреции ионов натрия и калия при введении гистохрома в дозе 1 мг/кг (см. табл. 1). В первую очередь это касается натрийуреза. На про­тяжении всего эксперимента происходило посту­пательное увеличение выделения с мочой ионов Na+, превосходившее к середине периода наблю­дения исходный уровень в 2 раза, а к концу экспе­римента - в 5 раз. Отметим, что в группе сравне­ния на фоне сходной динамики выделения натрия с мочой прирост абсолютных цифр экскреции иона был несколько ниже, превосходя исходные показатели к концу периода наблюдения лишь в 2 раза (см. табл. 2).

Относительно экскреции калия оказалось, что при использовании обеих доз гистохрома этот по­казатель проявил сходную динамику, которая ха­рактеризовалась увеличением выделения иона с мочой, превышавшим исходные цифры в 1,7-1,8 раза к окончанию обоих экспериментов.

При хроматографическом анализе мочи крыс обеих групп эхинохром в нативном виде обнару­жен не был (на иллюстрациях не представлено).

ОБСУЖДЕНИЕ

Рассматривая влияние на экскреторную функ­цию почек крыс различных доз гистохрома, мож­но заметить как сходные, так и различающиеся эффекты, зависящие от используемой дозы пре­парата. Обращает на себя внимание, что диуре­тическое действие в обоих случаях развивалось параллельно с увеличением экскреции креатини­на. Но если при применении дозы 1 мг/кг оба от­меченных показателя продемонстрировали лишь тенденцию к росту, доза 10 мг/кг обусловила су­щественный и примерно одинаковый прирост как суточного мочеотделения, так и выделения креа­тинина с мочой. Эта связь, на наш взгляд, имеет лишь одно объяснение: диуретический эффект гистохрома носит четкий дозозависимый харак­тер и обеспечивается увеличением скорости клу­бочковой фильтрации. Такое действие может быть обусловлено влиянием гистохрома на гладкую мускулатуру почечных сосудов, большее расши­рение которых при увеличении дозы приводит к росту почечного кровотока и скорости клубочко­вой фильтрации, что, в свою очередь, и результируется в развитии существенного диуретическо­го эффекта. Эта возможность находит косвенное подтверждение в результатах, полученных S.R. Lee и соавт. Авторы исследования отмечают, что гистохром, не оказывая прямого вазодилатирующего действия, обладает антихолинестеразной ак­тивностью и пролонгирует эффект ацетилхолина [10]. В то же время, известно, что ацетилхолин увеличивает кровоток благодаря продукции эпок- сиэйкозатриеновой кислоты эндотелием сосудов. Последняя, в свою очередь, вызывая гиперполя­ризацию мембран, снижает тонус гладкой муску­латуры сосудов [11]. Здесь интересно отметить, что гиперполяризующий эффект характерен и для эхинохрома А [12, 13]. Таким образом, логично предположить, что гистохром обладает непрямым вазодилатирующим действием, которое вносит свой вклад в реализацию диуретического дей­ствия препарата.

Относительно экскреции калия существенных различий в наших экспериментах выявлено не было. Этот факт указывает на то, что калийурез, возникающий в условиях длительного введения гистохрома, обусловлен угнетением его каналь­цевой реабсорбции. Очевидно, этот процесс ока­зался весьма чувствительным уже к воздействию дозы препарата 1 мг/кг, и ее увеличение не смогло обеспечить существенную прибавку калийуретического эффекта.

Касаясь влияния гистохрома на экскрецию на­трия, отметим, что его усиление также обуслов­лено снижением канальцевой реабсорбции, что привело к развитию натрийуретического эффекта в обоих экспериментах. При этом было зафикси­ровано, что меньшая доза препарата вызывала бо­лее выраженное увеличение выделение этого иона с мочой. Не исключено, что такое парадоксальное, на первый взгляд, действие можно объяснить сле­дующим образом. Установлено, что гистохром из­меняет электрофизиологические свойства люминальной мембраны почечных канальцев, подавляя пассивный транспорт натрия из просвета канальца внутрь клетки и снижая, таким образом, концен­трацию катионов, индуцирующих активность АТ- Фаз, необходимую для последующего активного переноса иона через базальную мембрану каналь­ца. В пользу такой возможности говорят литера­турные данные относительно АТФ-протекторного действия эхинохрома А [14]. Что же касается из­менения пассивной проницаемости люминальной мембраны клетки канальца, она может изменяться в результате не так давно выявленного нами мем­браностабилизирующего действия гистохрома [15]. Интересно, что в других наших эксперимен­тах более выраженное антиоксидантное действие гистохрома также проявлялось в меньшей дозе [6]. Не исключено, что подобный эффект мы наблюда­ли и в отношении влияния различных доз гистох­рома на экскрецию натрия.

Наконец, отсутствие нативного гистохрома в моче крыс, получавших препарат в дозах как 1 мг/ кг, так и 10 мг/кг, дает право утверждать, что выяв­ленные нами эффекты в отношении экскреторной функции почек обусловлены метаболитами пре­парата, которые определить не удалось. Вполне возможно, что различные метаболиты гистохро­ма, образующиеся в процессе биотрансформации у крыс, по-разному влияют на изученные параме­тры почечной функции.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенных экспериментов пока­зали, что характер изменения экскреторной функ­ции почек зависит от дозы гистохрома. Тенденция к увеличению суточного диуреза при введении 1 мг/кг препарата трансформировалась в досто­верное увеличение показателя при десятикратном увеличении дозы. В обоих случаях диуретическое действие развивалось параллельно с увеличени­ем экскреции креатинина. Вероятной причиной описанного явления может быть увеличение по­чечного кровотока вследствие возможного вазодилатирующего эффекта гистохрома. Изменение экскреции ионов, выявленной в эксперименте, ве­роятно, обусловлено угнетением канальцевой ре­абсорбции. При этом увеличение дозы препарата сопровождалось усилением эффекта. Отсутствие нативного гистохрома в моче позволяет предполо­жить, что описанные эффекты обусловлены мета­болитами препарата.