Preview

Нефрология

Расширенный поиск

ЗАВИСИМОСТЬ ПОЧЕЧНЫХ ЭФФЕКТОВ ГИСТОХРОМА У КРЫС ОТ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ДОЗЫ

https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-2-93-97

Полный текст:

Аннотация

ЦЕЛЬ. Гистохром – отечественный антиоксидантный препарат природного происхождения. Изучение фармакологической активности гистохрома показало, что препарат имеет широкий спектр дозозависимого действия. Целью настоящего исследования стало изучение характера изменения почечных эффектов у крыс при введении различных доз гистохрома. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. Исследование проводилось на аутбредных крысах линии сток Вистар. Подопытной группе животных (n=15) в течение 10 дней подкожно вводили гистохром в дозе 1 мг/кг, а группе сравнения (n=20) – в дозе 10 мг/кг. Начиная с 3-х суток, каждые два дня наблюдения измерялись величина суточного мочеотделения, экскреции с мочой ионов Na+ и K+, экскреция креатинина, а также экскреция самого гистохрома. РЕЗУЛЬТАТЫ. При введении гистохрома в дозе 1 мг/кг регистрировалась тенденция к увеличению суточного мочеотделения. В группе сравнения усиление диуреза привело к пятикратному увеличению показателя на 7-е сутки. Динамика почечной экскреции креатинина на фоне применения 1 мг/кг гистохрома имела стабильный характер в течение всего опыта, тогда как десятикратное увеличение дозы сопровождалось достоверным ростом показателя. Натрийурез поступательно увеличивался, превышая исходные значения в 5 раз, в подопытной группе животных. В группе сравнения экскреция иона возрастала в 2 раза. Экскреции калия имела сходную динамику при использовании обеих доз гистохрома. В нативном виде гистохром в моче не определялся ни в одной из групп животных. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Результаты экспериментов показали, что характер изменения экскреторной функции почек зависит от дозы гистохрома и может быть обусловлен его метаболитами.

Для цитирования:


Талалаева О.С., Зверев Я.Ф., Брюханов В.М., Жариков А.Ю. ЗАВИСИМОСТЬ ПОЧЕЧНЫХ ЭФФЕКТОВ ГИСТОХРОМА У КРЫС ОТ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ДОЗЫ. Нефрология. 2017;21(2):93-97. https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-2-93-97

For citation:


Talalaeva O.S., Zverev I.F., Bryukhanov V.M., Zharikov A.I. DOSE-DEPENDENDENT HISTOCHROME EFFECTS OF KIDNEY IN RATS. Nephrology (Saint-Petersburg). 2017;21(2):93-97. (In Russ.) https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-2-93-97

ВВЕДЕНИЕ

Гистохром - известный отечественный лекар­ственный препарат природного происхождения. Согласно действующей регистрационной номен­клатуре, он относится к группе антиоксидантных средств [1-3]. Вместе с тем, экспериментальные наблюдения последних лет позволяют существен­но расширить понимание особенностей фармако­логической активности данного препарата. Так, в недавних опытах мы установили, что гистохром в дозе 10 мг/кг оказывает выраженный мочегонный эффект, механизм которого не поддается тради­ционному для классических диуретиков объясне­нию [4, 5]. Параллельно нами было обнаружено, что в той же дозе гистохром в опытах на крысах, вопреки имеющимся представлениям, обладает не анти-, а прооксидантной активностью. В то же время, при десятикратном снижении дозировки препарата наблюдался противоположный (и хо­рошо согласующийся с общепринятым мнением) эффект: подавление оксидативного стресса в кро­ви подопытных животных [6, 7]. Таким образом, мы установили зависимость влияния испытуемо­го препарата на процесс свободно-радикального окисления от использованной дозы. В этой связи возник вопрос, не присутствует ли подобная за­висимость при действии гистохрома на функцию почек? Изучение экскреторной способности по­чек крыс в условиях введения 1 и 10 мг/кг гистох­рома стало целью настоящего исследования.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Исследование проводилось в условиях хрони­ческого эксперимента на аутбредных крысах сток Вистар обоего пола в возрасте 2-3 мес и массой 200-300 г, выращенных в питомнике ГУ НИИ ци­тологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск). За четыре недели до начала эксперимента животные помещались в индивидуальные клетки, приспосо­бленные для сбора мочи, где находились в услови­ях стандартной лабораторной диеты, свободного потребления обычной питьевой воды, естествен­ного освещения и температурного режима 18­22 °C. В течение указанного адаптационного пе­риода осуществлялась оценка пригодности крыс для изучения влияния лекарственного средства на экскреторную функцию почек согласно отра­ботанной в нашей лаборатории методике [8]. По итогам такой оценки в подопытную группу для непосредственного изучения влияния гистохрома на функцию почек в дозе 1 мг/кг было отобрано 15 крыс. Введение препарата осуществлялось еже­дневно на протяжении 10 дней путем подкожных инъекций. Раствор для инъекций готовился разве­дением заводской лекарственной формы «Гистох­ром® раствор для внутривенного введения 1%» обычным физиологическим раствором с таким расчетом, чтобы вводимая доза содержалась в 1 мл. В процессе исследования в подопытной груп­пе на 3-, 5-, 7-, 9-е и 11-е сутки периода наблюде­ния измерялись следующие показатели: величина суточного мочеотделения, экскреция с мочой ио­нов Na+ и K+, экскреция креатинина, а также экс­креция самого гистохрома. Экскрецию ионов Na+ и K+ оценивали методом пламенной фотометрии. Определение креатинина проводилось с исполь­зованием реакции образования основания Шиф- фа, количество которого затем детектировалось фотометрическим способом [8]. Определение экскреции гистохрома с мочой проводилось при помощи высокоэффективной жидкостной хрома­тографии на хроматографе «Милихром-А02». Ре­зультаты влияния гистохрома на функцию почек в дозе 10 мг/кг были взяты из нашего предыдуще­го эксперимента [8]. В данном исследовании они служили объектом сравнения.

Эксперименты выполнены с соблюдением принципов и директив Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации и в со­ответствии с «Правилами проведения работ с ис­пользованием экспериментальных животных».

При статистическом анализе данных использо­вали пакет прикладных статистических программ «Statistica 7.0» («StatSoft», США). Результаты представлены в виде среднего арифметического ± ошибка средней. Статистическую значимость различий двух средних определяли с помощью критерия Вилкоксона. Нулевую статистическую гипотезу об отсутствии различий и связей отвер­гали при p<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Проведенные эксперименты показали, что, не­смотря на длительное непрерывное введение ги­стохрома в дозе 1 мг/кг, прирост величины суточ­ного мочеотделения проявлялся лишь в виде тен­денции, превышая исходный уровень на 11-64% в отдельные дни наблюдения (табл. 1).

При этом все отмеченные изменения оказались недостоверными. В то же время, в группе сравне­ния, получавшей препарат в дозе 10 мг/кг, фик­сировалось последовательное усиление диуреза, достигавшее своего максимума к 7-му дню введе­ния, когда он превышал исходные значения почти в 5 раз. Диуретический эффект в этих условиях сохранялся даже через 1 сут после отмены пре­парата, превышая исходные значения более чем в 3,5 раза (табл. 2).

В отношении динамики почечной экскреции креатинина у животных, получавших гистохром в дозе 1 мг/кг, было установлено, что этот пока­затель также имел весьма стабильный характер в течение всего опыта. Как следует из табл. 1, фик­сировались лишь небольшие колебания суточной элиминации креатинина, превышавшие исходные значения на 30%, которые не являлись статисти­чески достоверными и что примерно соответство­вало приросту суточного мочеотделения. У крыс группы сравнения в ходе эксперимента также было зафиксировано увеличение экскреции креа- тинина, параллельное росту диуреза, однако это увеличение было намного более выраженным с пиком на седьмой день введения препарата, когда описываемый показатель превосходил исходный уровень в 5,6 раза (см. табл. 2).

Иная динамика была зафиксирована в отноше­нии почечной экскреции ионов натрия и калия при введении гистохрома в дозе 1 мг/кг (см. табл. 1). В первую очередь это касается натрийуреза. На про­тяжении всего эксперимента происходило посту­пательное увеличение выделения с мочой ионов Na+, превосходившее к середине периода наблю­дения исходный уровень в 2 раза, а к концу экспе­римента - в 5 раз. Отметим, что в группе сравне­ния на фоне сходной динамики выделения натрия с мочой прирост абсолютных цифр экскреции иона был несколько ниже, превосходя исходные показатели к концу периода наблюдения лишь в 2 раза (см. табл. 2).

Относительно экскреции калия оказалось, что при использовании обеих доз гистохрома этот по­казатель проявил сходную динамику, которая ха­рактеризовалась увеличением выделения иона с мочой, превышавшим исходные цифры в 1,7-1,8 раза к окончанию обоих экспериментов.

При хроматографическом анализе мочи крыс обеих групп эхинохром в нативном виде обнару­жен не был (на иллюстрациях не представлено).

ОБСУЖДЕНИЕ

Рассматривая влияние на экскреторную функ­цию почек крыс различных доз гистохрома, мож­но заметить как сходные, так и различающиеся эффекты, зависящие от используемой дозы пре­парата. Обращает на себя внимание, что диуре­тическое действие в обоих случаях развивалось параллельно с увеличением экскреции креатини­на. Но если при применении дозы 1 мг/кг оба от­меченных показателя продемонстрировали лишь тенденцию к росту, доза 10 мг/кг обусловила су­щественный и примерно одинаковый прирост как суточного мочеотделения, так и выделения креа­тинина с мочой. Эта связь, на наш взгляд, имеет лишь одно объяснение: диуретический эффект гистохрома носит четкий дозозависимый харак­тер и обеспечивается увеличением скорости клу­бочковой фильтрации. Такое действие может быть обусловлено влиянием гистохрома на гладкую мускулатуру почечных сосудов, большее расши­рение которых при увеличении дозы приводит к росту почечного кровотока и скорости клубочко­вой фильтрации, что, в свою очередь, и результируется в развитии существенного диуретическо­го эффекта. Эта возможность находит косвенное подтверждение в результатах, полученных S.R. Lee и соавт. Авторы исследования отмечают, что гистохром, не оказывая прямого вазодилатирующего действия, обладает антихолинестеразной ак­тивностью и пролонгирует эффект ацетилхолина [10]. В то же время, известно, что ацетилхолин увеличивает кровоток благодаря продукции эпок- сиэйкозатриеновой кислоты эндотелием сосудов. Последняя, в свою очередь, вызывая гиперполя­ризацию мембран, снижает тонус гладкой муску­латуры сосудов [11]. Здесь интересно отметить, что гиперполяризующий эффект характерен и для эхинохрома А [12, 13]. Таким образом, логично предположить, что гистохром обладает непрямым вазодилатирующим действием, которое вносит свой вклад в реализацию диуретического дей­ствия препарата.

 

Таблица 1

Влияние гистохрома в дозе 1 мг/кг на экскреторную функцию почек у крыс (n=15)

Дни наблюдения

Показатель

Диурез, мл/сут

Экскреция креатинина, (ммоль/сут)

Экскреция Na+ (мкмоль/сут)

Экскреция K+ (мкмоль/сут)

Исходный уровень

3,6 ± 0,73

5,5 ± 0,77

38 ± 1,2

262 ± 32,7

3-и сутки

4,5±0,85

7,1±1,37

23±5,3

527±47,3*

5-е сутки

5,4±0,91

7,2±0,84

83±34,5

455±64,2*

7-е сутки

5,0±1,05

7,0±1,72

79±23,3

380±38,7*

9-е сутки

5,9±0,93

7,0±1,04

188±49,7*

450±46,5*

11-е сутки

4,0±0,70

6,9±0,83

195±45,9*

372±35,3*

Примечание. Здесь и в табл. 2: звездочками обозначены достоверные отличия от показателей исходного уровня (p<0,05).

 

Таблица 2

Влияние гистохрома в дозе 10 мг/кг на экскреторную функцию почек у крыс (n=20)

Дни наблюдения

Показатель

Диурез, мл/сут

Экскреция креатинина, (ммоль/сут)

Экскреция Na+ (мкмоль/сут)

Экскреция K+ (мкмоль/сут)

Исходный уровень

2,9±0,40

3,3±0,34

37,7±3,20

496±32,1

3-и сутки

6,1±1,03

2,3±0,28

31,4±2,93

464±65,5

5-е сутки

11,4±1,88

9,2±1,38

32,7±4,07

492±42,8

7-е сутки

15,2±2,05

18,6±2,24

45,4±4,27

571±53,6

9-е сутки

12,1±1,57

12,7±2,71

57,0±11,7

797±59,3

11-е сутки

11,6±1,50

10,8±1,91

74,5±12,62

870±66,3

Относительно экскреции калия существенных различий в наших экспериментах выявлено не было. Этот факт указывает на то, что калийурез, возникающий в условиях длительного введения гистохрома, обусловлен угнетением его каналь­цевой реабсорбции. Очевидно, этот процесс ока­зался весьма чувствительным уже к воздействию дозы препарата 1 мг/кг, и ее увеличение не смогло обеспечить существенную прибавку калийуретического эффекта.

Касаясь влияния гистохрома на экскрецию на­трия, отметим, что его усиление также обуслов­лено снижением канальцевой реабсорбции, что привело к развитию натрийуретического эффекта в обоих экспериментах. При этом было зафикси­ровано, что меньшая доза препарата вызывала бо­лее выраженное увеличение выделение этого иона с мочой. Не исключено, что такое парадоксальное, на первый взгляд, действие можно объяснить сле­дующим образом. Установлено, что гистохром из­меняет электрофизиологические свойства люминальной мембраны почечных канальцев, подавляя пассивный транспорт натрия из просвета канальца внутрь клетки и снижая, таким образом, концен­трацию катионов, индуцирующих активность АТ- Фаз, необходимую для последующего активного переноса иона через базальную мембрану каналь­ца. В пользу такой возможности говорят литера­турные данные относительно АТФ-протекторного действия эхинохрома А [14]. Что же касается из­менения пассивной проницаемости люминальной мембраны клетки канальца, она может изменяться в результате не так давно выявленного нами мем­браностабилизирующего действия гистохрома [15]. Интересно, что в других наших эксперимен­тах более выраженное антиоксидантное действие гистохрома также проявлялось в меньшей дозе [6]. Не исключено, что подобный эффект мы наблюда­ли и в отношении влияния различных доз гистох­рома на экскрецию натрия.

Наконец, отсутствие нативного гистохрома в моче крыс, получавших препарат в дозах как 1 мг/ кг, так и 10 мг/кг, дает право утверждать, что выяв­ленные нами эффекты в отношении экскреторной функции почек обусловлены метаболитами пре­парата, которые определить не удалось. Вполне возможно, что различные метаболиты гистохро­ма, образующиеся в процессе биотрансформации у крыс, по-разному влияют на изученные параме­тры почечной функции.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенных экспериментов пока­зали, что характер изменения экскреторной функ­ции почек зависит от дозы гистохрома. Тенденция к увеличению суточного диуреза при введении 1 мг/кг препарата трансформировалась в досто­верное увеличение показателя при десятикратном увеличении дозы. В обоих случаях диуретическое действие развивалось параллельно с увеличени­ем экскреции креатинина. Вероятной причиной описанного явления может быть увеличение по­чечного кровотока вследствие возможного вазодилатирующего эффекта гистохрома. Изменение экскреции ионов, выявленной в эксперименте, ве­роятно, обусловлено угнетением канальцевой ре­абсорбции. При этом увеличение дозы препарата сопровождалось усилением эффекта. Отсутствие нативного гистохрома в моче позволяет предполо­жить, что описанные эффекты обусловлены мета­болитами препарата.

Об авторах

О. С. Талалаева
Алтайский государственный медицинский университет
Россия

Талалаева Ольга Сергеевна, кандидат медицинских наук

Кафедра патологической физиологии.

656038, Россия, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40.



Я. Ф. Зверев
Алтайский государственный медицинский университет
Россия

Профессор Зверев Яков Федорович, доктор медицинских наук 

Кафедра фармакологии

656038, Россия, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40.

 


В. М. Брюханов
Алтайский государственный медицинский университет
Россия
Профессор Брюханов Валерий Михайлович, доктор медицинских наук 

Кафедра фармакологии

656038, Россия, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40.

 


А. Ю. Жариков
Алтайский государственный медицинский университет
Россия
Профессор Жариков Александр Юрьевич, доктор биологических наук 

Кафедра фармакологии

656038, Россия, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40.



Список литературы

1. http://grls.rosminzdrav.ru/Grls_View_v2.aspx?idReg=38019&t=

2. Мищенко НП, Федореев СА, Багирова ВЛ. Новый оригинальный отечественный препарат гистохром. Химфармацевт журн 2003:37(1): 49-53 [Mishchenko NP, Fedoreev SA, Bagirova VL. Novy`i` original`ny`i` otechestvenny`i` preparat gistokhrom. Him.-farmatcevt. zhurn 2003:37(1): 49-53].

3. Большая Российская энциклопедия лекарственных средств, Москва,2001, «Ремедиум», том 2, с.171 [Bol`shaia Rossii`skaia e`ntciclopediia lekarstvenny`kh sredstv, Moskva,2001, «Remedium», tom 2, s.171]

4. Талалаева ОС, Жариков АЮ, Федореев СА и др. Влияние гистохрома на экскреторную функцию почек в эксперименте. Бюлл сибирск мед 2011; (5): 101-104 [Talalaeva OS, Zharikov AIU, Fedoreev SA i dr. Vliianie gistokhroma na e`kskre-tornuiu funktciiu pochek v e`ksperimente. Biull. sibirskoi` meditciny` 2011; (5): 101-104.]

5. Патент. № 2408367 РФ. Диуретическое средство / Лампатов ВВ, Жариков АЮ, Федореев СА, Мищенко НП; опубл. 10.01.2011 [Pat. № 2408367 RF. Diureticheskoe sredstvo / Lampatov VV, Zharikov AIu, Fedoreev SA, Mishchenko NP; opubl.10.01.2011]

6. Талалаева ОС, Мищенко НП, Брюханов ВМ и др. Влияние гистохрома на процесс свободнорадикального окисления в эксперименте. Бюлл СО РАМН 2011:3(31):6367 [Talalaeva OS, Mishchenko NP, Briuhanov VM i dr. Vliianie gistokhroma na pro-tcess svobodnoradikal`nogo okisleniia v e`ksperimente. Biull. SO RAMN 2011:3(31):63-67]

7. Талалаева ОС. О взаимосвязи противовоспалительного и антиоксидантного эффектов гистохрома. Вестн уральск мед акад науки 2011; 3(1): 48 [Talalaeva OS. O vzaimosviazi protivovospalitel`nogo i antioksidantnogo e`f-fektov gistokhroma. Vestneyk ural`skoi` meditcinskoi` akademicheskoi` nauki. 2011; 3(1): 48]

8. Брюханов ВМ, Зверев ЯФ, Лампатов ВВ, Жариков АЮ. Методические подходы к изучению функции почек в эксперименте на животных. Нефрология 2009; 13(3): 52-62 [Briuhanov VM, Zverev IAF, Lampatov VV, Zharikov AIU. Metodicheskie podhody` k izucheniiu funktcii pochek v e`ksperimente na zhivotny`kh. Nefrologiia 2009; 13(3): 52-62]

9. Хафизьянова РХ. Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии. Медицина, М., 2006; 373 с [Hafiz`ianova RKH. Matematicheskaia statistika v e`ksperimental`noi` i clini-cheskoi` farmakologii. Meditcina, M., 2006; 373 s]

10. Lee SR, Pronto JR, Sarankhuu B-E et al. Acetylcholinesterase Inhibitory Activity of Pigment Echinochrome A from Sea Urchin Scaphenus mirabilis. Mar Drugs 2014:12:3560-3573. doi: 10.3390/MD12063560

11. Campbell WB, Fleming I. Epoxyeicosatrienoic acids and endothelium-depended response. Pflugers Arch 2010:459(6):88195. doi: 10.1007/s00424-010-0804-6

12. Sedova K, Bernikova O, Azarov J et all. Effects of echinochrome on ventricular repolarization in acute ischemia. J Electrocardiol 2015:48(2):181-186. гиперполяризация

13. Мищенко НП, Федореев СА, Запара ТА и др. Влияние гистохрома и эмоксипина на биофизические свойства электровозбудимых клеток. Бюлл эксперим биол и мед 2009:147(2):155-159 [Mishchenko NP, Fedoreev SA, Zapara TA i dr. Vliianie gistokhroma i e`moksipina na biofizicheskie svoi`stva e`lektrovozbudimy`kh cletok. Biull. e`ksperim. biol. i med. 2009:147(2):155-159]

14. Афанасьева ТА, Ласукова ТВ, Чернявский АМ. АТФсберегающий эффект гистохрома при острой ишемии миокарда больных ишемической болезнью сердца. Бюлл эксперим биол и мед 1997:124(12):669-671 [Afanas`eva TA, Lasukova TV, Cherniavskii` AM. ATF-sberegaiushchii` e`ffekt gis-tokhroma pri ostroi` ishemii miokarda bol`ny`kh ishemicheskoi` bolezn`iu serdtca. Biull. e`ksperim. biol. i med. 1997:124(12):669-671]

15. Талалаева ОС, Зверев ЯФ, Замятина СВ, Брюханов ВМ и др. Влияние гистохрома на осмотическую резистентность эритроцитов в эксперименте in vitro in vivo. Сиб мед журн 2012:27(4):70-74 [Talalaeva OS, Zverev IAF, Zamiatina SV, Briuhanov V.M. i dr. Vliianie gisto-khroma na osmoticheskuiu rezistentnost` e`ritrotcitov v e`ksperimente in vitro in vivo. Sib.med zhurnal 2012:27(4):70-74]


Для цитирования:


Талалаева О.С., Зверев Я.Ф., Брюханов В.М., Жариков А.Ю. ЗАВИСИМОСТЬ ПОЧЕЧНЫХ ЭФФЕКТОВ ГИСТОХРОМА У КРЫС ОТ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ДОЗЫ. Нефрология. 2017;21(2):93-97. https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-2-93-97

For citation:


Talalaeva O.S., Zverev I.F., Bryukhanov V.M., Zharikov A.I. DOSE-DEPENDENDENT HISTOCHROME EFFECTS OF KIDNEY IN RATS. Nephrology (Saint-Petersburg). 2017;21(2):93-97. (In Russ.) https://doi.org/10.24884/1561-6274-2017-21-2-93-97

Просмотров: 121


ISSN 1561-6274 (Print)
ISSN 2541-9439 (Online)